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加強檢測性能利用納米檢測 | |||
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ELISA試劑盒和側流檢測的檢測技術,可以提高靈敏度,同時降低了所使用的試劑的總量。在免疫診斷和核酸檢測方法在共同使用的固體表面,其上的生物活性試劑的涂層,如抗體,抗原,或低聚物探針。這種生物大分子復雜的長鏈結構,擁有最佳的三維構象特異位點的結合位點或表位。然而,常規的生物活性分子沉積到固體表面上是一個低效的和隨機的過程。而可以很容易地涂布到塑料表面的抗體,例如,只有一個子集所沉積的分子將具有可用于反應的Fab結合區域(參見圖1)。這種隨機性的assayís結合能力和靈敏度依賴于傳統的涂層技術限制。
納米智能檢測系統(網絡入侵檢測系統)技術,通過ANP Technologies公司(特拉華州Newark)已被設計為在納米水平的生物活性分子的取向控制用的聚合物支架共價結合的粘合劑如antibody.1在此共軛結構的聚合物支架優先附著于固體表面延伸表面相差的合算的免疫反應的抗體。的共軛本身的表面上面向納米抗體分子自組裝陣列。其結果是涂覆的表面,具有更大的結合效率。這樣的取向控制和自組裝的好處,可以擴展到任何生物活性分子。
NIDS技術已被應用到預涂微孔板,創造出一系列高度敏感的工具,可用于藥物發現和臨床前研究和臨床研究。ANP技術開發:NIDS激活鏈霉親和素(SA) - neutravidin(NA)涂層鋼板名為HyperBind的。生物素化的抗體和其它蛋白質是一種常見的過程,而該時與HyperBind板相結合,以更高的靈敏度和降低試劑usage.2這使研究人員能夠不進行所要求的復雜的合成方法的情況下得到網絡入侵檢測系統的好處納米操縱,檢測到用戶的提供。HyperBind板中提供清晰,黑,白等色,熒光和化學發光檢測格式格式,分別為。HyperBind板塊已經比較許多其他的商業板塊。實現共軛鏈菌素或neutravidin的錨定聚合物支架的納米定位導致了性能增強。
生物素蛋白直接綁定SA HyperBind板已表現出更大的結合效率生物素蛋白,比其他商業SA板(見圖2)。在一個有代表性的實驗中,生物素化的小鼠IgG的抗體濃度增加100μL,分別加入的井的HyperBind板,一個Nunc公司防盜系統,一個皮爾斯HBC Reacti-綁定,和一個R&D系統EvenCoat板,和培養上的一小時搖床。洗滌后,向孔中加入100μL的兔抗小鼠IgG抗體結合到辣根過氧化物酶(HRP),并允許一個一個半小時,在一個平臺上搖床孵育。在洗滌工序中,由過氧化氫和四甲基聯苯胺(TMB)的基板/色原試劑加入到孔中。顏色發展20分鐘,并用2N硫酸停止,并在450 nm處測定吸光度。
NA板與的黑色HyperBind SA以及用于基于熒光的檢測進行了類似的比較。涂上黑色原料聚苯乙烯??微孔板與鏈霉和neutravidin的使用NIDS化學為清澈板優化。的結合效率的HyperBind板被證明是優于皮爾斯Reacti-Bind和Nunc公司防盜系統黑色板的使用前面所描述的熒光酶底物試劑(參見圖3)與生物素化的小鼠IgG的測試程序時,。
白酒板塊也被視為與NIDS激活鏈霉親和素的使用基于化學發光的檢測。的結合效率的HyperBind板也顯示出優于Nunc公司防盜系統白色板時使用的測試程序與前面所描述的生物素標記的小鼠IgG和化學發光底物試劑。
從上面的實驗中得出的結論是,對于一個給定濃度的生物素標記抗體添加到微孔中,更多的蛋白質可以比皮爾斯,R&D系統,NUNC板HyperBind清晰,黑色和白色板的約束。這一發現可以轉化為更好的檢測性能和減少試劑的使用和成本。
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