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BART發光的分子診斷概述 | |||
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BART是一個發光的分子診斷,可以減少儀器的成本和開拓新的應用,在資源貧乏的診斷和疾病監測報告系統。只需要一個單一的高溫加熱塊和一個光電二極管的光檢測系統,BART被設計用于與等溫核酸擴增的技術(iNAAT)。它結合了簡單和堅固的化學和技術在實時,閉管分析(需要最小的電輸入端和溫度調節),和不太苛刻的樣品制備。BART幾個當前可用的系統和其他系統的后期發展相比具有優勢,并可以提高在發展中國家的艾滋病患者病毒載量監測。
BART點關心分子診斷系統。在分子診斷通常使用的iNAATs,的產生的擴增子以指數速度。其結果是,焦磷酸(PPi)的擴增子生產的一種副產物,也產生成倍增長。通過鏈接的指數生成的焦磷酸,三磷酸腺苷(ATP)的合成,它是可以使用的程度定量擴增通過(參見圖1)發射的光的熒光素酶報告的螢火蟲熒光素酶的熱穩定版本。因為BART技術如下的過程,而不是絕對測量的濃度的變化率,它是魯棒不同樣品類型和寬容大量的脫氧腺苷三磷酸(的dATP,螢火蟲螢光素酶的底物)和相當數量的污染ATP的和PPi 11
熱穩定的熒光素酶的使用是必不可少的的BART技術,自大多數iNAATs操作在在50°至65°C。迄今為止,BART已集成一些基于等溫iNAATs的使用如Bst多DNA聚合酶的鏈置換聚合酶11的某些方法所固有的特異性是如此之高,這是足以跟隨焦磷酸生產推斷的靶分析物特異性擴增。
看出,在熒光的方法中,首先是隨著擴增的進行,隨后迅速下降時,焦磷酸的濃度上升到目前為止發光的大量增加,成為抑制是非常不同的從BART記者系統的光輸出螢光素酶反應(參見圖1)。這種不尋常的性質,BART輸出使人們有可能確定結果已經完成,而不需要復雜或高度敏感的光探測器。達到這個峰值的光發射所需要的時間是在樣品中的靶核酸的量成反比。因此,BART作用定量時的結果已經顯示出類似的快速PCR系統(參見圖2a和2b)。
BART的優點BART試驗可以實時跟蹤,允許定量分析,并在一個封閉的容器格式中進行,從而減少了污染的危險。的BART生物化學裝置的獨特性質,結果可檢測使用一個簡單的光檢測系統(例如,光電二極管),有利于及早檢測和決策不需要一個昂貴的,高靈敏度的光檢測裝置(參見圖3) 。BART技術已被證明是更寬容的DNA聚合酶用于iNAATs,是一個事實,即以共同抑制劑的影響較小減處理的樣品中,由于。同樣,也可以分析樣品的固有熒光或混濁,這是一個問題的其他方法,
這些特性可讓簡單的協議,作為一個整體對特定的測試要建立。例如,磁性粒子已被用于特定的捕獲的DNA,也沒有必要從有孔玻璃珠,以洗脫DNA,用PCR擴增,然后再嘗試。相反,可以直接加入珠粒的BART試劑,可以容忍的存在下
磁珠。這種增強的樣品寬容意味著可以簡化樣品制備的優勢,在資源有限的環境和具有挑戰性的物理環境中(見表二)。
BART是非常適合高通量應用,它同樣適用于高度分散的設置和集中需要高通量技術的實驗室。硬件也是便攜式電源或電池供電,最終在一個低成本的單位具有占地面積小,可用于在具有挑戰性的環境,包括非實驗室環境。在本質上,BART的設計是基于實驗室的分子診斷系統的筆記本電腦相當于(參見圖3)。
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