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大學的實驗室已經研究單分子檢測 | |||
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在過去的15個或更多的years.2 4但沒有太多這方面的努力已開發尚未進入體外診斷試劑的應用,這是其商業化的賣點。所使用的單分子檢測技術往往是共焦熒光,熒光基于雙激發,表面增強拉曼光譜和電化學(例如,電流,阻抗)。其實這些技術有的已經商業化,并將于短期內商業化別人。
單分子檢測的雙光子激發討論在1995年就1998.5,6漂白即使在美國國家標準與技術研究所(NIST,馬里蘭州蓋瑟斯堡)單分子檢測提供了一個教程,但用共聚焦顯微鏡。有關單分子檢測的SERS的一個最初的文章發表在1997.2但是,即使這些研究表明,單分子檢測是可行的,沒有太大的日期已經商品化。
兩個單分子檢測技術,是被商業化的一個是使用共聚焦顯微鏡的單模波導(參見圖1)。Pacific Biosciences公司采用這種技術的結合標記的核苷酸闡明DNA序列,通過DNA聚合酶。雖然這個概念很簡單,經過數年的概念驗證證明。有了這項技術,所有的化學成分都包含在一個單模波導/孔板。
甲被綁定到導板內的DNA單鏈,并允許DNA聚合酶合成互補鏈,用含有熒光基團的核苷酸。作為熒光團釋放后,每個堿基除了引導區域,它是用熒光測量,不同的熒光基團的染料,用于每個核苷酸。如果系統能夠測量的每一步前進的道路上的每個堿基此外,DNA序列可以被確定。圖1中所示的基本的系統。當然,該方法具有其他應用程序(例如,RNA等),并預計很快將其商業化。
另一種單分子檢測方法,是利用結合電化學檢測中的納米孔。使用惰性材料,或通過蛋白質增量劑層時,可能會創建的納米孔。在這種情況下,幾何形狀,大小和電荷的因素。電化學檢測技術可以是一條直線的電流測量的阻抗。積聚的電荷的表面上,是最常用的方法。幾個IVD應用浮現在腦海中,特別是免疫。的表面上的另外的蛋白質會導致額外的離子本,導致阻抗的變化。因此,該方法可用于診斷的目的。的方法之一,是捕捉到特定的DNA片段,這將導致在該電荷產生。可以實現通過互補對存在,或特定的蛋白質或肽的捕獲。
雖然一些應用這些技術被制作成單分子檢測可能是很難完成的。但牛津納米孔技術有限公司(英國牛津)已經開發了一種材料,可以捕捉特定核苷酸后釋放他們。加上電化學檢測,這種方法產生的特定的單分子檢測。公司對齊將此技術與DNA測序,釋放的核苷酸產生獨特的信號,然后可以觀察到的。
在過去六年中,電化學檢測的電化學檢測方法已經商品化。這兩種方法都是微陣列,檢測,可以實現對微電極。一種方法是在電極系統,是由分子診斷Osmetech(加利福尼亞州帕薩迪納)(請參閱圖2和3)。以DNA為基礎的在一個芯片上有眾多的檢測試劑盒的操作。標簽只存在互補雙工形成。報告基團是連接到的DNA(或蛋白質分子)二茂鐵分子。
該系統不需要洗滌步驟,以除去過量的標記的單鏈的DNA。因此,雜交后的讀數是,掃描電壓范圍內產生的電流,然后檢測。電流的幅度是與存在的材料的量。的Osmetech系統市售三個基因診斷測試,包括華法林,囊腫性纖維化和血栓形成的風險測試,并已通過美國FDA認證。該測試可在墨盒格式,移動通過微流體和液體。
目前正在銷售的另一項技術是電化學檢測系統由COMBIMATRIX(華盛頓Mukilteo)(見圖4-6)。這個概念是相似的:微電子陣列系統上進行檢測。微電極涂布層,在其上可進行的化學與生物。這些化學物質可能會通過各種手段在表面上的蛋白質的DNA合成或安置。互補DNA的分子可以含有生物素分子(蛋白質)與HRP標記的strepavidin相加(這個格式可能會被改變)。
HRP消耗,這反過來又導致減少在電極表面氧化的襯底基板。的電流,然后測量,觀察到的電流的量是根據被捕獲在表面上的HRP量。的系統,或電流,測量所釋放的電子從電容器,然后將其流血取得讀數。一個12K的芯片讀出需要60秒。甲蛋白測定α-1-酸糖蛋白(AGP)與標準曲線如圖5所示。用于檢測的DNA樣品中的加標樣品,不同濃度的添加樣品列于圖6。
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