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| 關鍵的評估對于充足率各種細胞表達系統今天仍 | |||
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除了常規細胞表達系統之前使用,今天的技術提供有趣的選擇通過瞬態哺乳動物細胞系統,能產生顯著的更高的收益。 12 然而,這樣的系統不受限制的適用性對于臨床診斷應該被認真評估。 廣泛的知識和經驗獲得了在過去的十年里已經導致了下面的結論就明智的和面向目標的應用在常規的重組autoantigens商業臨床診斷可靠性。 Biotechnologically產生自身抗原目標提供可靠的替代本地抗原,有時甚至超過本國同行(即。 ,TPO),基于觀測的越來越多的測試套件,使用它們。
獨特性。 幾個經常應用autoantigens只能產生recombinantly(如。 ,著絲粒蛋白B和A)。由于無法逾越的困難從自然資源中提取其他autoantigens,他們主要是甚至完全商業化作為重組蛋白(如。 、丙氨酰/ threonyl-tRNA synthetases(pl 12、pl 7],formiminotransferase cyclodeaminase(LC1],細胞色素P450 2 d6[LKM1],Ro / ss一個[52負責]蛋白質)。
很多很多的大型批量再現性。 高質量的重組自身抗原產品貢獻有助于開發的細試管產品。 一個有價值的特性與復雜的重組抗原表達和純化生產系統是大型批量一致性高很多很多(見圖 1 和 2 )。
蛋白質的表達在桿狀病毒感染昆蟲細胞和純化到至少90%的同質性。 抗原是點綴在硝化纖維帶和孵化與主要血清和二級美聯社抗體軛合物,其次通過開發和NBT / BCIP。 數據由r . l . Humbel教授,盧森堡。分析復雜的抗原。 一些自身抗原目標可以在性質和組成復雜不同的單一多肽。 為了區分血清學亞種、離散和理想情況下重組抗原目標域應檢查。 圖3 顯示結果的分析基于個體重組抗原抗體U1-snRNP(68/70負責,和C多肽),線粒體M2抗原(完整的和個人的,BCOADC-E2多肽,OGDC-E2 pdc e2),核糖體組織磷酸化蛋白奠定基礎(P0,P1,P2)。
的意義越來越重要的生物技術自身抗原的目標變得更加清晰當10年記錄的臨床相關的診斷抗原是與最近的一個概述autoantigens重組(見 表II )。 11 此表只列出了那些autoantigens是商用關鍵組件,因為他們滿足下列要求:
非常高純度(95%以上),可以通過六組氨酸融合蛋白。 這種高純度使隨后的溫柔和高效固定化金屬親和層析純化(見圖 4 和 5 )。 13
證實了免疫/抗原功能。
高穩定性,它允許存儲至少5年沒有喪失免疫活動(見圖 6 和 7 )。
足夠高的收益率產生很多大小多達數幾百毫克。
建立標準的生產流程。
沒有疑問的適用性在所有試管試驗技術,目前可用的(如。 、ELISA、線測定,immunodot,珠的基礎技術,如磁或熒光染料標記的多路傳輸系統、蛋白質生物芯片/微陣列)。
凈化的LC1。 桿狀病毒感染昆蟲細胞溶解產物(CL)是應用于鎳加載螯合瓊脂糖柱,水洗(W),并與緩沖區的eluted咪唑濃度的增加(Fr。1 Fr。 5)。標記是表示。 純LC1 elutes作為64 -負責蛋白質純度> 95%的有(Fr。4)。
因為多路復用系統和蛋白質生物芯片/微陣列是相對較新的和高度創新,他們值得進一步討論其發展的當前狀態。 因為穩步增長和新興技術的可用性multianalyte的質量驗證重組抗原必須不僅維持,但也增加了為了滿足每一個需求在未來應用試管。 抗原應適合化學耦合使用幾乎任何化學和能被發現在許多表面。
凝膠電泳和免疫印跡分析三個獨立的很多(一)著絲粒蛋白B,(B)喬1和(c)增殖細胞核抗原。 蛋白質的分離在6 - 20%梯度凝膠和轉移到PVDF膜。 探討了膜與病人血清和發達與美聯社共軛反人類的IgG抗體NBT / BCIP緊隨其后。
大多數抗原的研究和發展Diarect管道已經被用于開發和生產數組或珠式多路化驗自從他們的使用進行了探討研究,分析自身抗原陣列自身抗體。 14、15 微陣列和越來越多路復用技術將經常珠基于基因組和蛋白質組學的方法補充發現自身免疫。 最近的研究提供了一個更大的理解中,這些新技術。
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