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| 實驗室需要高通量技術巴特非常適合 | |||
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巴特是一個生物熒光記者分子診斷系統,可以降低儀器成本和開辟新的應用診斷和疾病監測在資源貧乏的環境中。 只需要一個single-temperature加熱塊和原有光探測系統,巴特是專為使用等溫核酸擴增技術(iNAAT)。 它結合了簡單而強大的化學和技術在實時closed-tube分析(要求最小的電輸入和溫度調節),啟動時樣品制備。 巴特具有與一些現有的系統和其他系統相比在后期開發中,并能提高監測病毒載量在發展中國家的艾滋病患者。
iNAATs通常用于分子診斷產生amplicons速度指數。 因此,焦磷酸(PPi)擴增子生產的副產品,也是生成的指數。 通過鏈接的PPi指數生成三磷酸腺苷(ATP)合成,可以使用耐熱性的版本的螢火蟲熒光素酶報告通過發出的光放大的程度定量熒光素酶(參見圖1)。因為巴特技術遵循的變化率過程而不是進行絕對測量濃度,不同的樣本類型是健壯的和寬容大量的脫氧腺苷三磷酸(螢火蟲luciferases dATP也是襯底)和大量污染ATP和PPi的。 11
使用耐熱性的luciferases巴特技術是至關重要的,因為大多數iNAATs 50°、65°C之間運行。 到目前為止,巴特已經集成了幾個等溫iNAATs基于使用鏈置換聚合酶如Bst DNA聚合酶。 11 某些固有的特異性方法是如此之高,足以跟PPi生產來推斷目標分析物的具體放大。
巴特記者的光輸出系統非常不同的熒光方法,首先是大量增加光發射放大收益,其次是快速減少當PPi濃度上升就成為抑制熒光素酶反應(見圖1)。這種不同尋常的性質巴特輸出結果可以決定什么時候已經完成,而不需要復雜的或高度敏感的光探測器。 光發射的時間達到這一峰值成反比目標核酸樣本的數量。 因此,巴特行為定量,time-to-result已被證明是類似于快速PCR系統(參見圖2 a和2 b)。
巴特測試可以實時跟蹤,使定量分析,和closed-vessel格式執行,從而減少污染的風險。 獨特的巴特生物化學的性質意味著結果可以發現使用一個簡單的(如光探測系統。 光電二極管),便于及早發現和決策不需要昂貴的,高度敏感的光探測裝置(見圖3)。巴特技術已被證明是更加寬容的處理樣品,由于使用的DNA聚合酶iNAATs由常見抑制劑的影響較小。 同樣,可以分析樣品,有固有熒光或者是渾濁的,這對于其他技術是一個問題。
這些屬性使簡單的協議建立特定測試作為一個整體。 例如,磁性粒子已被用于捕獲特定的DNA,沒有必要從珠子之前洗提DNA擴增聚合酶鏈反應。 相反,珠子可以直接添加到巴特試劑,可容忍的存在
磁珠。 寬容意味著樣品制備的這種增強樣品可以簡化,優勢資源和具有挑戰性的物理環境(見表2)。
巴特非常適合高通量應用程序,使其同樣有用的高度分散的設置和集中的實驗室需要高通量技術。 硬件也便攜和由電源或電池供電,并在一個低成本的單位占用空間小,可用于具有挑戰性的環境,包括non-laboratory設置。 從本質上講,巴特被設計成筆記本相當于以實驗室為基礎的分子診斷系統(參見圖3)。
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