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| 克服靈敏度限制橫向流動免疫分析標記技術 | |||
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免疫分析測試，利用一種抗體的特異性結合抗原。免疫學技術的主要特點是適當的標記的抗體或抗原。這個標簽可以創建一個信號，與免疫反應并允許感興趣的分析物的檢測。在實驗室實驗中，各種洗滌步驟需要除去游離的標記或未標記的反應物和允許的范圍和標記的反應物的分析物的檢測。試驗結果進行校準曲線比較，量化。
相反，著名的橫向流動免疫分析（lfias），如懷孕測試，不需要洗滌步驟。在側流試驗系統，抗原抗體反應，以及過量的反應物的去除，通過色譜分離發生。檢測試劑（例如，標記抗體）和樣品吸液芯通過測試條片或膜。在捕獲線，檢測試劑與捕捉劑的相互作用，它已被固定在膜。試驗結果是視覺評估，通常由兩個線的測試線和控制線。
與其它免疫分析格式的lfias相比，主要優點是使用方便；除了分配的樣品，沒有額外的處理步驟通常是必要的。因此，lfias可以通過nontrained用戶和現場使用過程中樣品的采集容易。測試的簡單，搭配他們的快速返回的結果（2–15分鐘），這意味著測試的成本效益。
盡管有這些優點，lfias往往局限于篩選中的應用。這是因為lfias，在其目前的形式，是不容易量化，不適合某些應用是足夠敏感。本文將研究橫向流敏感性的相關問題，探討特殊的標記方法可以克服格式的局限性。
標記方法第一個方法是在20世紀50年代末進行的。他們被歸類為放射免疫測定法，使用同位素131I，其高靈敏度增加測試時間，作為一個標簽。1要執行這些類型的測試，閃爍體組成和防護設備的要求。作為一個結果，現場測試是不可行的。即使如此，在20世紀70年代后期，固相免疫分析131I作為標記開發。2該測試系統，這是在一個流動裝置進行通信，可以被認為是一個現代的側流技術的先驅。
在上世紀80年代，出現的酶標簽。這些高度敏感的測試可能不需要廣泛的安全要求。3今天，我們不能想象沒有這樣的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）免疫指標分析。在一般情況下，過氧化物酶標記免疫試劑用于這些測試，和信號是通過添加適當的底物溶液后產生免疫反應。信號強度可以測量光度法和它與校準曲線比較量化。膜為基礎的檢測，另一方面，堿性磷酸酶標簽通常是由于底物轉化產生的顏色視覺可以檢測。4然而，結果通常是難以量化的。在理論上，它可以使用酶標記lfias，但是開發一個可讀的顏色所必需的過程是不可行的在實驗室外。
熒光和化學發光免疫分析也得到了發展，以及適當的讀者。雖然這些標記技術可用于lfias，復雜而昂貴的檢測設備的要求限制了這種測試市場。同使用順磁性顆粒作為標簽是真的。
為lfias，標簽如膠體金，碳粒子，或乳膠珠，使視覺檢測沒有額外的讀者，被使用，但與酶的底物轉化的標簽，無增強效應是可能的。因此，由于抗體粒子的比例相對較高，只有較低的靈敏度是這樣的標簽了。
局限性與其它免疫分析，一個lfia靈敏度的測試中使用的抗體的親和力的影響。在最佳生理條件下，一種抗體的親和常數是有價值的，不能被改善時，負責測試的靈敏度。這是不變的情況下，生化抗體。然而，如果抗體標記，這可能導致的空間位阻的限制，造成改變，甚至完全喪失，親和力。5
生化指示標簽，如酶或熒光團，通常使用的抗體的主要結構的賴氨酸殘基的反應性氨基。如果這種共軛影響抗體的親和力，標簽可以采用羧基谷氨酸或天冬氨酸殘基。6在無標記如金的情況，可能會有一些抗體的親和力下降。因此，最佳標記條件必須憑經驗確定。然而，需要注意的是，許多抗體的重要，當使用視覺標記的方法，不提供必要的高親和力常數（即使未標記的）需要滿足所需的各種分析物的檢測限為。
除了抗體的親和力，有大量的其他條件可能會限制免疫測定法的靈敏度。7除了樣本矩陣和抗體標記，膜或墊可以對測試結果的影響。在硝酸纖維素膜上，例如，芯吸速率在測試過程中起著關鍵的作用。一般而言，較高的芯吸率，靈敏度較低，尤其是當使用具有低親和常數的抗體。
的靈敏度也可以通過測試的設計問題，如膜厚度的影響，膜的預處理，并對固定化和標記的反應物的濃度。這意味著，例如，這一損失由于膜問題的靈敏度可以通過增加的固定化抗原濃度對膜和標記抗體的補償。然而，這通常需要增加試劑的體積，因此，增加的成本。這也可能導致的損失的特異性和較高的檢測背景。
雖然許多不同的lfias已被開發，濫用檢測妊娠試驗和藥仍然是最常見的和眾所周知的。一個很好的理由，這些流行的測試中經常使用的尿液樣本矩陣。由于它的鹽含量和中性pH值，尿提供了幾乎最優條件穩定性和親和力抗體。如血液或唾液復雜的矩陣也提供生理鹽和pH值條件下，但也含有高量的蛋白質，脂類，和多糖。這些物質可以與實驗室樣品制備方法分離，但現場試驗，對樣品制備的需要，應保持在最低限度。
另一種是特殊的樣品墊，可以去除干擾物質的使用。用于食品和環境樣品的測試，在更大的樣本的純度是必要的，特殊的緩沖條件必須創造必要的生理條件下的測試。為了實現這些是通過稀釋樣品緩沖液中的最簡單的方法。然而，這樣做，也往往沖淡分析的興趣，導致虧損的靈敏度。
在克服lfias靈敏度的限制，還需要搭配不同的測試組件。除此之外，因為抗體的親和力是有限的，一個測試的靈敏度可以增加通過使用不同的標簽。用于熒光，新的和高度敏感的讀者發光的發展，或順磁性標簽已經創造了新的機會。但這些測試往往是更昂貴，由于規模和復雜性的讀者，是有限的現場測試。
實現更強的信號，另一種方法是增加抗體的標記密度。以下描述的熒光標記的光學讀取immunodipstick法（佛羅里達州）技術，一種新型的熒光標記方法，顯示了一個高達三個數量級的靈敏度增加相對于傳統側流標記方法可以同時仍然能夠以一個簡單的檢測結果，手提燈。
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