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極端敏感性的測試線和控制線的出現 | |||
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佛羅里達州的格式是一個基于標記的生物標志物的使用cibitest公司協(xié)議的特殊方法(新烏爾姆,德國)。測試條制造,以同樣的方式作為傳統(tǒng)lfias,使用標準的設備,如BioDot Inc. BioDot xyz3050平臺(歐文,CA)和標準測試條的材料如用Whatman國際有限公司immunopore硝酸纖維素膜(梅德斯通,肯特,英國)。然而,在對比傳統(tǒng)的lfias,其中金顆粒或乳膠顆粒作為標簽使用的熒光染料,佛羅里達。這個標記技術,一個只有一少部分每兆的檢測限可與競爭免疫分析以及直接格式像夾心分析法實現,同時還獲得視覺信號。
在間接免疫所示的情況下(例如,lfias使用膠體金),在測試結果的評價沒有顯著的變化是必要的(參見圖1)。當兩個線路的測試線和控制線的出現,樣品中沒有被分析物。如果只控制線出現,對應的截止水平,分析物的存在。
由于,佛羅里達技術采用熒光染料的事實,評估測試條要求的熒光團的附加勵磁。然而,由于特殊的標記方法,結果在一個非常強的熒光信號,一個簡化的讀者是足夠用于此任務。插入測試帶到手持燈后,測試信號產生的測試和控制線路可以檢測視覺(參見圖2)。由于其鮮明的信號,佛羅里達州產生快速免疫分析的強烈著色的標本。由于與一個手持燈效果的評價,結果可以在惡劣的照明,甚至在完全的黑暗中。
佛羅里達州的敏感性佛羅里達的極端敏感性可以通過一定的熒光共軛高密度的載體分子,然后結合抗體熒光復雜的實現。的增強作用的結果從熒光基團共軛單抗體的比率非常高。熒光染料的直接結合與抗體(例如,通過NHS酯染料),熒光抗體的摩爾比為約100–提高1000倍。因此,在三個數量級的靈敏度的增加,可以實現。
證明,這種敏感性與親和純化的抗血清確定?β-內酰胺類抗生素。如圖所示圖3該抗血清,采用競爭ELISA以及在佛羅里達州的格式在緩沖溶液氨芐青霉素的檢測。ELISA的檢測限為約0.5毫微克/毫升,和測試的中點為10毫微克/毫升(10 ppb),有很好的對應,這類試驗的期望。為定量佛羅里達的格式,為10 pg / mL的截止值(10個百分點)的測定。這一發(fā)現有大約三個數量從傳統(tǒng)的金標記的側流試驗的平均靈敏度幅值。8可比的敏感性可以經常只有在實驗室環(huán)境下實現了放射免疫測定法。但是佛羅里達的系統(tǒng)是一個現場測試,最新的數據顯示,在靈敏度這意外的增加連接到特殊的方法結合熒光抗體。
熒光信號的穩(wěn)定性用于佛羅里達系統(tǒng)熒光耐光性是不是測試性能的一個限制因素。隨著凍干的熒光測試杯之前使用存儲在黑暗的環(huán)境中。可以進行測試,在白天沒有問題。即使長色譜最多20分鐘不引起光漂白。使用手持燈評估后,條帶進行干燥和容易獲得的。只要他們都儲存在黑暗條件下,信號可以直觀地看,即使經過18個多月。
它也有可能對信號的光電方式(例如,使用適當的軟件一起電荷耦合器件照相機)。如圖所示圖4,與零信號相比,增加的熒光背景可以檢測。這樣的背景信號通常不干擾測試的視覺評估。采用光電檢測系統(tǒng)時,適當的截止選擇將分離的背景信號從測試信號完全。通過令人興奮而不是紫外線藍光熒光團,可能可以降低干擾。然而,可能還有一些標本的熒光會引起強背景信號。例如,一個熒光基團與佛羅里達州目前使用的技術是不適合用牛奶。這是因為一個測試條用牛奶樣品和藍色光激發(fā)會表現出綠色熒光,不易辨識。
另一個例子是吖啶測試。這種物質,這是在某些微生物的選擇性富集補充(例如,單),也有一個自發(fā)熒光干擾測試信號。為了能夠使用這些矩陣的佛羅里達州的格式,其他的熒光團與更大的斯托克斯位移正在開發(fā)。這樣的熒光團發(fā)射在一個紅色的光譜范圍,可以輕易地分辨出綠色熒光。發(fā)展中的標簽,不斷提高檢測系統(tǒng)(例如,通過創(chuàng)建,允許讀者的客觀評價結果)。然而,有一個問題仍然是困難的,或在某些情況下是不可能的,要解決的是標簽的增加靈敏度超過一定限度。
通常情況下,檢測限較低的部分每十億范圍內發(fā)現,有一種特別的抗體可能稍低。相反,可以使用嗎啡側流測定,只能通過改變膠體金標簽從佛羅里達的方法,通過100級的測試靈敏度增加,沒有任何進一步的優(yōu)化。唯一的區(qū)別是一個簡單的讀者的要求。由于佛羅里達州的標記方法創(chuàng)造了強烈的信號,不需要非常復雜和昂貴的讀者,如與其他標記方法的開發(fā)。現有的熒光標記技術,順磁性顆粒,和其他更奇特的標簽提供良好的靈敏度和量化的可能性,當然比黃金或乳膠。然而,對測試系統(tǒng)的成本,以及檢測設備,使這些技術只適用于高成本的分析。佛羅里達州的方法,另一方面,使視覺讀數與基本的讀者,可在低成本的篩選應用具有高靈敏度的需要。
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