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| 使用LowCross緩沖區(qū)可以提高酶聯(lián)免疫結(jié)果的可靠性 | |||
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可以顯示測(cè)定結(jié)果的可靠性，通過(guò)精密的檔案。臨床前研究，F(xiàn)DA要求ELISA驗(yàn)證，包括精密型材精密型材的ELISA與標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（PBS / BSA吐溫）和緩沖器（LowCross坦率生物科技有限公司，Weissensberg，德國(guó)）。一個(gè)實(shí)驗(yàn)性的治療性蛋白質(zhì)藥物，測(cè)定在有競(jìng)爭(zhēng)力的格式。在人血清中摻入蛋白質(zhì)藥物，然后用于測(cè)量在分析緩沖液稀釋為1:750。在檢測(cè)藥物的安全性研究，F(xiàn)DA指定的變異系數(shù)（CV）必須不超過(guò)15％，在整個(gè)測(cè)量范圍。
比較精密的 檔案揭示了顯著的程度這酶聯(lián)免疫吸附，用于在藥物研究，檢測(cè)到一個(gè)實(shí)驗(yàn)性的治療性蛋白質(zhì)（即，候選藥物）在人血清中。這是進(jìn)行了生物素標(biāo)記的示蹤劑的蛋白作為藥物在競(jìng)爭(zhēng)激烈的格式。檢測(cè)與NeutrAvidin HRP共軛。候選藥物在人血清中摻入以測(cè)量校準(zhǔn)曲線。然后，血清稀釋1:750前測(cè)量的分析緩沖液中。此ELISA驗(yàn)證只有在使用新的干擾減少緩沖液，在整個(gè)測(cè)量范圍內(nèi)，可以達(dá)到所要求的精度的FDA guidance.12的。
圖3。（點(diǎn)擊放大）用于免疫毒理學(xué)研究對(duì)免疫球蛋白的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)豚鼠所示。在標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)緩沖液（a）和50毫微克/毫升（1-6）和10毫微克/毫升（7-12）的濃度在LowCross緩沖器（二）稀釋的分析物。相當(dāng)于在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)展的一個(gè)步驟，捕獲和檢測(cè)抗體滴定板乙到G行的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定緩沖液（一），特異性控制誤報(bào)（A行）和空白值（行H）寵壞了解釋和評(píng)價(jià)。使用LowCross緩沖液（B），但是，防止假陽(yáng)性信號(hào)。
來(lái)源：，帕拉生物科技有限公司（德國(guó)Gronau）。
另一個(gè)ELISA對(duì)豚鼠的免疫球蛋白，用于免疫毒理學(xué)研究，這是一個(gè)試驗(yàn)，顯示了如何在新的緩沖區(qū)，可以幫助避免假陽(yáng)性結(jié)果（見圖3）。的山羊抗豚鼠IgG F（AB'）2作為捕獲抗體和山羊抗豚鼠IgG（與Fcγ）生物素化的檢測(cè)器所用的抗體。豚鼠IgG抗體（待測(cè)物）稀釋的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)緩沖區(qū)和緩沖區(qū)LowCross的。在圖中，取值范圍1-6表示的濃度為50納克/毫升，而代表10毫微克/毫升的范圍是7-12。
圖3中描繪板在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)展的一個(gè)步驟。標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)緩沖板，可以看出，在采集和檢測(cè)抗體滴定行乙G.誤報(bào)特異性控制（??A行）和空白值（排H）寵壞了解釋和評(píng)??價(jià)。的LowCross緩沖區(qū)的使用防止了假陽(yáng)性信號(hào)，而且，使檢測(cè)系列稀釋液中的行乙1-6至G和B到G 7-12（參見圖3b）。
這兩套比較酶聯(lián)免疫吸附的結(jié)果表明新的緩沖區(qū)的有效性對(duì)矩陣衍生的和未知的干擾影響，導(dǎo)致檢測(cè)不精確或誤報(bào)。可以確認(rèn)的緩沖區(qū)的普遍適用性以及在其效力的記錄，異嗜性血清。
一個(gè)CE認(rèn)證的診斷方法，對(duì)HAMA，ELISA從MEDAC聯(lián)系（德國(guó)Wedel）被用來(lái)檢測(cè)HAMA干擾。這ELISA測(cè)量跨橋異嗜性抗體。研究者使用它來(lái)測(cè)試市售HAMA血清中的面板Scantibodies公司實(shí)驗(yàn)室公司（加利福尼亞州Santee）和從in.vent Diagnostica公司聯(lián)系（Hennigsdorf的，德國(guó)）得到的測(cè)試和示出一個(gè)HAMA的潛力的目的出售受體阻滯劑或HAMA-阻斷劑，防止干擾來(lái)自如血清。顯然，提供商所提供的面板包括范圍廣泛的不同的和非常關(guān)鍵的嗜異性血清以顯示潛在的對(duì)HAMA-阻斷劑和可能出現(xiàn)的問(wèn)題從嗜性病人血清。
圖4。（點(diǎn)擊放大）選擇性結(jié)果緩沖區(qū)上LowCross HAMA反應(yīng)的效果，量化的研究使用的HAMA-ELISA MEDAC GMBH（德國(guó)Wedel）。新緩沖區(qū)推HAMA反應(yīng)在所有血清樣品下40-ng/ml在產(chǎn)品說(shuō)明書中規(guī)定的截止明確檢測(cè)反應(yīng)。
當(dāng)完整的板進(jìn)行了測(cè)試，每一個(gè)異嗜性的干涉效應(yīng)被克服的干擾減少緩沖區(qū)。低于40毫微克/毫升，表明不存在干擾效應(yīng)的信號(hào)，根據(jù)對(duì)HAMA-ELISA手冊(cè)。簡(jiǎn)短的研究表明，簡(jiǎn)單地通過(guò)從標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液（名為MEDAC室女-DIL）切換到新的測(cè)定緩沖液中（參見圖4），可以有效地最小化干擾。
重要的是要注意HAMA-ELISA的陽(yáng)性對(duì)照仍為陽(yáng)性與LowCross緩沖區(qū)，而不是推下截止。（這些數(shù)據(jù)在圖中未示出）的陽(yáng)性對(duì)照是不哈馬斯，但交聯(lián)的二抗（山羊抗小鼠IgG抗體）。這表明，從正常的檢測(cè)抗體的信號(hào)而受到負(fù)面影響的新的測(cè)定緩沖液。
應(yīng)用潛力
免疫處理醫(yī)療問(wèn)題，不同顯著所需的答案。
檢測(cè)抗原檢測(cè)傳染性疾病的檢測(cè)檢測(cè)甚至非常低的濃度的抗原，例如，病毒顆粒。既不漏報(bào)，也不是可以接受的誤報(bào)。檢測(cè)抗體可以表現(xiàn)出極高的親和力與KD值在10-11或10-12米的范圍內(nèi)，每一種干擾，應(yīng)該大大降低，為了得到最可靠的診斷。良好的可靠性在最初的測(cè)試中，可以最大限度地減少成本的關(guān)鍵感染的二線測(cè)試。對(duì)于感染性疾病的檢測(cè)，測(cè)定抗體和干擾結(jié)合的親合性的親合性之間的差異是非常大的。
另一方面，自身免疫性疾病檢測(cè)和過(guò)敏測(cè)試地址不同的醫(yī)療問(wèn)題。在這些實(shí)驗(yàn)中，患者的自身抗體或過(guò)敏性抗體，不顯示非常高的親和力應(yīng)該被檢測(cè)出。病人具有中等親和力的抗體可以是疾病結(jié)構(gòu)的一部分，因此，應(yīng)包含在該信號(hào)甚至中等親合力結(jié)合。
完全不同的醫(yī)療需求傳染性疾病檢測(cè)對(duì)過(guò)敏性測(cè)試表明，有必要為不同程度的減少干擾。顯然，有很強(qiáng)的干擾降低的解決方案實(shí)現(xiàn)了最大的安全性。然而，在這樣的濃溶液，測(cè)定抗體表現(xiàn)出非常高的親和力。換句話說(shuō)，一個(gè)具有非常強(qiáng)的干擾減速進(jìn)行的測(cè)定具有非常高的耐任何種類的干涉。較溫和的干擾降低，更多的干擾的影響會(huì)發(fā)生，即使使用的干擾減少緩沖區(qū)。但是，這樣一個(gè)溫和的干擾減速，甚至中等親和力的病人抗體可以正確檢測(cè)。
圖5。（點(diǎn)擊放大）影響類風(fēng)濕血清HAMA-ELISA檢測(cè)緩沖液（MEDAC VIR-DIL）相比于交聯(lián)反應(yīng)的的各種配方的LowCross緩沖的。交聯(lián)，會(huì)導(dǎo)致免疫診斷試劑中的錯(cuò)誤的結(jié)果。新緩沖區(qū)的所有的制劑可以防止不必要的類風(fēng)濕因子和檢測(cè)抗體之間的結(jié)合，根據(jù)交聯(lián)的親合性。檢測(cè)抗體和分析物之間的結(jié)合是較高的親和力。
為了滿足不同免疫診斷需求，坦率生物科學(xué)提供LowCross的緩沖區(qū)免疫診斷試劑制造商指定為輕度，經(jīng)典，強(qiáng)的配方。的經(jīng)典制劑提供了測(cè)定抗體的親和力和大多數(shù)干擾效應(yīng)的強(qiáng)度之間的最佳折衷，并適用于大多數(shù)應(yīng)用。為專業(yè)用戶，如免疫診斷試劑制造商創(chuàng)建的先進(jìn)配方溫和強(qiáng)，有特殊的應(yīng)用需要。所有三種配方可以推干擾效應(yīng)的交聯(lián)反應(yīng)HAMA-ELISA截止40-ng/ml（見圖5）來(lái)自下類風(fēng)濕因子血清，但經(jīng)典和強(qiáng)有較大的影響，從而導(dǎo)致檢測(cè)具有更好的可靠性。這些試驗(yàn)結(jié)果表明，這種新的緩沖區(qū)方法不僅可以普遍使用，但也適應(yīng)具體的實(shí)驗(yàn)和臨床要求，如果需要。
這種干擾減速動(dòng)作模式是低和中等的親和力結(jié)合（干涉效應(yīng)），一方面，高親和性結(jié)合（檢測(cè)抗體對(duì)分析物）的另一區(qū)別。因此，它是不是一個(gè)受體阻滯劑的某些物質(zhì)，而是親和鑒別。如果太多的HAMA是在患者的樣品中，這不能被阻塞過(guò)于低濃度的HAMA-受體阻滯劑。然而，沒有觀察到這種效果，因?yàn)樗淖饔梅绞讲煌男碌木彌_區(qū)。雖然HAMA-阻斷劑可能會(huì)對(duì)給藥的濃度過(guò)低，新的親和鑒別器的性能是不依賴于病人的具體HAMA濃度。這進(jìn)一步增強(qiáng)與新的測(cè)定緩沖液中做的檢測(cè)的可靠性和魯棒性。
結(jié)論
描述的研究在這篇文章中展示，親和鑒別一個(gè)新的緩沖區(qū)有可能處理具有很寬的頻譜的干擾。減少干擾，提高了檢測(cè)的可靠性。FDA要求非常高的精度水平進(jìn)行臨床前或臨床研究免疫。各種實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明的廣泛的潛在的新的測(cè)定稀釋劑，以確保達(dá)到所要求的精度和可靠性。
直到最近，只有特定的和非常有限的，以克服干擾的方法，如HAMA-受體阻滯劑，是可用的。而是一個(gè)新的方法，可用于幾乎任何類型的干擾，既不限于哈馬斯或heterophiles已經(jīng)開發(fā)也沒有交叉反應(yīng)或基體效應(yīng)。這是普遍的，消除所有這些問(wèn)題的一種技術(shù)。如果必要的話，可以進(jìn)一步調(diào)整，以滿足特定的需求。顯示其潛在的臨床前和臨床研究中檢測(cè)和食品診斷以及人類診斷檢測(cè)緩沖區(qū)。它是被用來(lái)在橫流測(cè)定，酶聯(lián)免疫吸附，蛋白質(zhì)芯片和Western印跡試劑盒的生產(chǎn)。
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