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非特異性結合和基體效應交叉反應密切相關現象 | |||
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但是,也有差異,這些效應的分子起源。這些差異在日常實驗室程序很少被注意到。如果交叉反應物是已知的,有競爭的交叉反應物的濃度可以測量它的交叉反應性,那么這的確是一個交叉反應。在非特異性結合的情況下,比目標分析物的濃度遠遠高于物質都存在。這些可以是清蛋白或免疫球蛋白,或什至表面,如ELISA孔或Western印跡膜的固定化抗體的蛋白質陣列或斑點11
基質效應的術語是用來表示試樣和影響的靶分析物的測量的過程中出現的所有組件的所有干擾的影響。13的總和,如果實際的分子造成的影響是不確定的,但已知的來自試樣,那么它被稱為基體效應。樣的效果和其他之間的邊界是靈活的,有時不明確。有些基質效應派生從antianimal抗體,其他內源性干擾的結果,或只是引起的試樣的粘度,pH值,或鹽的濃度。
內源性標本組件原因
即使是自然存在的蛋白質樣品中的免疫測定法可干擾。一些眾所周知的干擾物質的人血清白蛋白,補體因子,溶菌酶,α-1抗胰蛋白酶,血纖維蛋白原。4的低分子量的分析物,可以與白蛋白結合。這使得難以分析物的抗體。此外,許多激素運輸蛋白結合,導致空間位阻的檢測。因此,確定激素免疫診斷試劑是公知的,具有高的變異系數。
此外,許多蛋白能夠結合其他物質,這是其生物功能的一部分。白蛋白,補體,和C-反應蛋白是天然的受體為許多物質。非特異性結合和交叉反應是表達他們的生物學功能,但可能會干擾檢測。內源性蛋白可以結合的檢測抗體,作為一個干擾因素,或可能掩蓋了目標分析物。溶菌酶,例如,非特異性結合的大多數蛋白質具有低的等電點。因此,抗體等電點為約五可以綁定,從而搭建一座橋梁之間的捕獲和檢測抗體形成。另一種重要的內源性成分的效果是由強烈的含脂試樣的干擾。一些分析物是脂溶性的,因此,測定抗體和分析物之間的鍵可以由脂質的影響。
一個通用的解決方案無論他們來自矩陣,交叉反應,從內源性物質,或從病人疾病,大多數干擾的影響有一個共同點:它們涉及到中低親和力的結合反應在檢測過程中procedure.6具體結合的檢測抗體,分析物是高親和力的結合。然而,各種綁定是否只有中低親和力或高親和可能會導致在相同的檢測信號。
一個通用方法,以防止這些干擾的影響,將阻止所有低收入和中等親和力結合,而不是只有專門異嗜性抗體阻斷。這可以實現通過與高嚴格的試驗緩沖液。這種辦法可以防止一切干擾影響,一步到位,但它也將產生負面影響的正確??信號檢測抗體。因此,使用高嚴謹緩沖區是??不是一種有效的選擇。高親和力結合的檢測抗體必須不會受到影響。
之間的高親和力結合,一方面,中低親和力結合其他歧視在這方面的成功是很重要的。這是稱為LowCross緩沖液,新開發的坦率Bioscience公司聯系(Weissensberg,德國)的測定緩沖液中的行動模式。通過高親和性結合不具有有害的影響,此緩沖區不降低高親和力的結合劑的真實信號。但它確實大大減少中低親和性結合。這可以防止大多數干擾效應的外觀,不論是否是已知的分子的干擾源。可以用作檢測緩沖液或抗體稀釋液的干擾減速器。即,試樣或測定抗體,或兩者兼而有之,可以在此緩沖液稀釋。最重要的是,測定抗體和分析物之間的結合反應發生在LowCross緩沖區。
抗體用于免疫診斷試劑盒的檢測器將被存儲在長期的抗體稀釋液中。因此,新的緩沖區,也可以在一個穩定的配方稱為LowCross-HRP。此穩定劑溶液HRP偶聯物也表現出該技術的基本盡量減少干擾的影響,當然。有了它,檢測抗體可以被存儲在4℃下使用的低濃度長時間。這樣可以節省在測定過程中的預稀釋步驟。
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