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| 生物標志物的發展納米技術為基礎的蛋白質檢測 | |||
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近的臨床研究表明,早期診斷某些疾病的需要更加精準的檢測相關的蛋白質標志物,在濃度存在低于檢測限電流診斷免疫測定技術。 1、2 例如,最近的一項研究檢查心臟肌鈣蛋白I(心肌肌鈣蛋白I)水平,黃金標準測試用于診斷急性心肌梗塞,證明存在任何檢測心肌肌鈣蛋白I的住院死亡率增加有關。 3 一個更敏感的心肌肌鈣蛋白i分析可以使一個更快速診斷急性心肌梗死和不穩定型心絞痛的分化從涵蓋形式的胸痛。 2 之前的研究也表明,診斷前列腺癌根治性前列腺切除術后復發可以方便檢測低水平的前列腺特異抗原(PSA)。
與早期診斷,臨床醫生可以啟動適當的治療病人,病人預后早些時候可能受益。 此外,最近的評估subpicomolar水平的淀粉樣蛋白b派生擴散性的配體(ADDL)腦脊液(CSF)使用一種超靈敏的蛋白質檢測分析指出潛在的開發新的試管測試疾病如阿爾茨海默氏癥。 7 由于低濃度ADDL CSF(不到1點),檢測ADDL使用傳統免疫分析檢測腦脊液中格式是不可能的。 7 這一先進的檢測靈敏度提供了更多的機會去學習新的疾病和人血清標志物的CSF。
Biobarcode化驗的
最近的一項研究報道,繼德?biobarcode的化驗檢測蛋白質的目標水平六個數量級低于常規診斷分析(見圖1)。 8 本試驗利用抗體涂層磁珠捕獲和濃縮蛋白的目標。 捕獲的目標都貼有標簽的蛋白質納米粒子探測器,是coloaded黃金與針對性的二次抗體和單鏈DNA(ssDNA)或雙鏈DNA(dsDNA)條形碼。 由此產生的磁珠目標金納米復合物分離磁和水洗去除過剩探針。 DNA條形碼是釋放復雜,通過雜交,檢測表面固定化DNA探針和一個黃金納米顆粒(見寡核苷酸功能化 圖1一個 )。 9
金顆粒的增大,沉積銀,光散射粒子的檢測與Verigene讀者光學檢測系統由Nanosphere Inc。(諾斯布魯克,IL)。 10 檢測一個特定DNA條形碼序列表示一個特定的蛋白質的存在。 增加的敏感性是派生的部分從釋放多個條形碼/捕獲蛋白質的目標。 8 條碼的數量釋放取決于大小的金顆粒,直徑15納米金粒子包含100 DNA條形碼。 11 進一步提高靈敏度是由探測光散射從銀放大黃金粒子,使檢測的DNA拷貝/ 10000條形碼鑒定。 理論分析檢出限是大約100被俘蛋白質的目標。
使用抗體針對PSA在模型系統,本研究報告的檢測限180份10?PSA(30點)的一個緩沖鹽溶液。 8 biobarcode化驗的也被檢查以檢測其他蛋白質的目標包括ADDL腦脊液中,一個潛在的可溶性致病性標記為阿爾茨海默氏癥。 7 在一項30患者樣本,臨床相關的濃度檢測腦脊液中ADDL使用biobarcode化驗。 此外,多路復用化驗出了癌癥標記物,包括蛋白質PSA,人類絨毛膜促性腺激素(一個睪丸癌標記)和甲胎蛋白(一種肝細胞癌標記)。 12 多路復用的化驗使用不同的DNA條形碼序列與標記特定的抗體coloaded每個金探針作為指標對不同的蛋白標記物。
最近的一個調查,描述了一個替代方法來標記蛋白質的目標捕獲到抗體涂層后的磁珠。 13 代替一個coloaded黃金粒子,這種方法利用一個生物素化的二次抗體標記與鏈霉親和素涂覆金納米粒子和生物素化的ssDNA條形碼(見 圖1 b )。 一旦ssDNA條形碼被免除復雜,DNA被檢測到上述coloaded探針格式(見 圖1 )。 使用生物素鏈霉親和素的方法,絕對的檢測極限0.01 pg / ml PSA(10成品/毫升,大約300點濃度)是實現一個優秀的劑量響應在磷酸緩沖鹽。 13 鑒于等效親和力的抗體,這種檢測格式可用于其它臨床相關的蛋白質標志物。
先前報告的分析結果biobarcode PSA使用模擬樣本,包括游離PSA飆升到磷酸緩沖鹽的解決方案包含洗滌劑和/或牛血清白蛋白。 這項研究的目標是測量檢測?限制的生物素鏈霉親和素biobarcode化驗使用總PSA(tPSA)飆升到人類血清樣品,并比較它與商用檢測平臺。 在病人血清和前列腺癌,約90%的PSA相關antichymotrypsin(ACT),以形成一個PSA法復雜,其余10%是免費的詩篇。
援助在標準化測試結果,世界衛生組織(世衛組織,日內瓦)開發了一個總PSA標準(NIBSC、代碼96/670),由90%和10%免費PSA法復雜PSA來模擬疾病狀態。 這個標準是用于研究上面所討論的。 兩種形式的PSA同樣可以被選中的PSA抗體對用于這項研究。 13 此外,內生PSA水平以女性血清和一組系列樣品的男人,經歷了根治性前列腺切除術和/或救助放療為了評估的效用分析使用臨床樣本
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